一种简单快捷的适用于多种微生物基因组DNA提取的方法

摘要：

本发明介绍了一种简单快捷的适用于多种微生物基因组DNA提取的方法。将不同的菌体先经过液氮研磨或加入适当的20％SDS后加入缓冲液和裂解液，或直接加入缓冲液和裂解液后，于60℃温浴15分钟，然后直接用苯酚∶氯仿∶异戊醇和氯仿抽提除蛋白，最后经无水乙醇沉淀和70％乙醇洗涤即得到较纯的、可直接用于PCR等基因操作的基因组DNA。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200510072233.3

申请日期：2005-05-27

公开/公告号：CN1869218

公开/公告日：2006-11-29

主分类号：C12N15/10(2006.01)I

申请/专利权人:中国科学院生态环境研究中心

发明/设计人:庄绪亮;谢慧君;陈 建;张洪勋

主申请人地址:100085北京市海淀区双清路18号

国别省市代码:北京;11

权利要求：

权利要求书1、一种基因组DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)菌体的洗涤：收集培养好的菌体，分别用磷酸缓冲液洗涤两次，(2)菌体的收集：酵母和细菌分别在6,000rpm离心8分钟收集菌体，而丝状真菌菌体采用真空抽滤的办法收集菌体，作后得到湿重为50～100g的菌体，(3)菌体破壁，菌体于60℃温浴15分钟，其特征在于：(a)丝状真菌先经过液氮研磨再加入300μL缓冲液和300μL裂解液，(b)酵母菌中先加入100μL的20％SDS后再加入300μL缓冲液和300μL裂解液，(c)细菌中直接加入300μL缓冲液和300μL裂解液后，(4)除蛋白：依次用苯酚∶氯仿∶异戊醇和氯仿抽提蛋白，(5)基因组DNA的沉淀：用2倍体积的冰乙醇，混匀后-20℃放置1小时，(6)基因组DNA的洗涤与干燥：沉淀用75％的乙醇洗涤两次后，自然干燥，最后用50μL无菌水溶解，即得到较纯的、可直接用于PCR等基因操作的基因组DNA。