一种快速检测乙型肝炎病毒耐药基因变异的方法
本发明属生物技术领域，涉及一种检测乙型肝炎病毒拉米夫定耐药相关基因变异的方法。本发明利用实时荧光定量PCR MGB Taqman探针技术，依据乙肝病毒拉米夫定耐药突变区YMDD核酸序列，设计引物及探针检测HBV YMDD区域的基因变异。采用PCR反应混合液A，B、Taq酶、HBV DNA抽提试剂、阴性质控品、ddH<sub>2</sub>O优化改进后制备诊断试剂盒。能快速准确检测出特定位点基因突变情况，并能对混合突变的病毒基因比例进行相对定量，可用于临床乙型肝炎药物治疗耐药突变的快速检测。本发明方法和试剂盒不受医疗机构仪器设备的条件限制，易于普及。
发明专利
CN200510065445.9
2005-04-06
CN1737164
2006-02-22
C12Q1/68(2006.01)I
上海复旦悦达生物技术有限公司%复旦大学
袁正宏;王 华;耿海峰;华 兵;邵 醇
201203上海市浦东张江高科技园区居里路1号
上海正旦专利代理有限公司
包兆宜
上海;31
1、一种快速检测乙型肝炎病毒耐药基因变异的方法，其特征是利用实时荧光定量PCRMGBTaqman探针技术，依据乙型肝炎病毒拉米夫定耐药突变区YMDD核酸序列，设计引物及探针检测HBVYMDD区域的基因变异，包括下述步骤，a、根据乙型肝炎病毒拉米夫定耐药性相关突变位点的靶基因序列设计、合成引物和荧光探针，所述的靶基因片段长度为50-200个碱基；b、上述引物和荧光探针与聚合酶链式反应成份组成荧光聚合酶链式反应体系，其中镁离子浓度为5mM，Taq酶的用量为0.25单位/反应；c、采用Chelex100抽提乙型肝炎病毒DNA，加入上述反应体系循环扩增；d、读取荧光值，判定基因变异情况，估算混合突变病毒毒株比例。