一种光学选择性酰胺酶筛选方法

摘要：

本发明提供了一种光学选择性酰胺酶的筛选方法。所述的方法按如下：取被测含酰胺酶的样品溶于pH为5～9的缓冲溶液中，添加羟胺，使羟胺终浓度为0.5～1.0M，并添加手性的S-酰胺或R-酰胺为底物，使手性的酰胺终浓度为5～30mM，于20～50℃水浴中进行反应，取反应所得转化液添加含Fe³⁺的溶液进行显色，若显红棕色则表明被测样品含有的酰胺酶的光学选择性与底物的立体构型一致或含有的酰胺酶没有光学选择性，若显淡黄色则表明被测样品含有的酰胺酶的光学选择性与底物的立体构型相反。所述方法不需对拟筛选的底物进行衍生化，能够利用简单的比色法快速鉴定所试微生物及其提取物的酰胺酶活性及光学选择性，具有筛选流程简单、速度快、设备要求低、通用性强等优点，为光学选择性酰胺酶的筛选带来了极大的便利。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200510062182.6

申请日期：2005-12-23

公开/公告号：CN1824795

公开/公告日：2006-08-30

主分类号：C12Q1/25(2006.01)I

申请/专利权人:浙江工业大学

发明/设计人:郑裕国;郑仁朝;沈寅初

主申请人地址:310014浙江省杭州市下城区朝晖六区

专利代理机构:杭州天正专利事务所有限公司

代理人:黄美娟%袁木棋

国别省市代码:浙江;33

权利要求：

1.一种光学选择性酰胺酶筛选方法，其特征在于所述的方法如下：取被测含酰胺酶的样品溶于pH为5～9的缓冲溶液中，添加羟胺，使羟胺终浓度为0.5～1.0M，并添加手性的S-酰胺或R-酰胺为底物，使手性的酰胺终浓度为5～30mM，于20～50℃水浴中进行反应，取反应所得转化液添加含Fe3+的溶液进行显色，若显红棕色则表明被测样品含有的酰胺酶的光学选择性与底物的立体构型一致或含有的酰胺酶没有光学选择性，若显淡黄色则表明被测样品含有的酰胺酶的光学选择性与底物的立体构型相反。