一种利用基因打靶技术制备哺乳动物乳腺生物反应器的方法

摘要：

本发明公开了一种利用基因打靶技术制备哺乳动物乳腺生物反应器的方法，包括下列步骤：1.将医用蛋白基因、Lox序列、Ploy(A)信号、筛选基因和lox序列构建到哺乳动物的乳蛋白基因的表达框架中，构建基因打靶载体；2.转化受体细胞并筛选；3.通过PCR和Southern分析，获得基因打靶的细胞株；4.基因打靶的细胞株的细胞核移植，获得基因打靶克隆动物；5.基因打靶动物的扩繁；6.将Cre蛋白质转入基因打靶羊的受精卵中或体细胞即再克隆，获得没有筛选基因的基因打靶动物；7.利用Cre-lox和IRES序列的特点，将第二个医用蛋白基因加到基因打靶动物中，获得能合成两个医用蛋白基因的基因打靶生物反应器。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200510055256.3

申请日期：2005-03-17

公开/公告号：CN1730659

公开/公告日：2006-02-08

主分类号：C12N15/85(2006.01)I

申请/专利权人:青岛森淼生物技术研究所

发明/设计人:袁三平;张义静;鲜 建

主申请人地址:266101山东省青岛市株州路177号惠特工业城A区5号楼二层

专利代理机构:北京英特普罗知识产权代理有限公司

代理人:马东晓

国别省市代码:山东;37

权利要求：

1、一种利用基因打靶技术制备非人哺乳动物乳腺生物反应器的方法，其特征在于该方法包括下列步骤：(1)将医用蛋白基因、Lox序列、Ploy(A)信号、筛选基因和lox序列构建到哺乳动物的乳蛋白基因的表达框架中，构建基因打靶载体；(2)转化受体细胞并筛选；(3)通过PCR和Southern分析，获得基因打靶的细胞株；(4)基因打靶的细胞株的细胞核移植，获得基因打靶克隆动物；(5)基因打靶动物的扩繁；(6)将Cre蛋白质转入基因打靶羊的受精卵中或体细胞即再克隆，获得没有筛选基因的基因打靶动物；(7)利用Cre-lox和IRES序列的特点，将第二个医用蛋白基因加到基因打靶动物中，获得能合成两个医用蛋白基因的基因打靶生物反应器。