一种综合的基因改组方法及所获得的重组基因和编码蛋白

摘要：

本发明涉及基因的指导进化，是一种综合的基因改组方法，首先选取待突变/改组的线性双链基因，采用易错PCR方法扩增15个循环，所得到的产物用80％酒精沉淀，清洗去除反应体系中的可溶性组分；然后在上述沉淀物中加入DNA聚合酶、dNTP、缓冲液和超纯水，组成StEP反应体系，并扩增得到改组基因，通过琼脂糖凝胶电泳，并对目的大小的DNA片段进行特异性扩增，然后进行表达与筛选，获得具有目的特征的改组基因。本发明可以有效的实现在一个反应过程中同时实现基因的随机突变和改组，并用合成酶基因sam1为起始基因验证了本发明的有效性，获得了能促进胞内SAM积累量提高的重组酶。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200510046413.4

申请日期：2005-05-13

公开/公告号：CN1861789

公开/公告日：2006-11-15

主分类号：C12N15/09(2006.01)I

申请/专利权人:中国科学院沈阳应用生态研究所

发明/设计人:吴文芳;安迎锋;吕安国

主申请人地址:110016辽宁省沈阳市沈河区文化路72号

专利代理机构:沈阳科苑专利商标代理有限公司

代理人:许宗富%周秀梅

国别省市代码:辽宁;21

权利要求：

权利要求书1.一种综合的基因改组方法，其特征在于：1)易错PCR：选取待突变/改组的线性双链基因，采用易错PCR方法扩增15个循环，所得到的产物用80％酒精沉淀，清洗去除反应体系中的可溶性组分；2)StEP反应：在上述沉淀物中加入DNA聚合酶、dNTP、缓冲液和超纯水，组成StEP反应体系，并扩增得到改组基因，通过琼脂糖凝胶电泳，并对目的大小的DNA片段进行特异性扩增，然后进行表达与筛选，获得具有目的特征的改组基因。