一种永生化人骨髓基质干细胞系及其建立方法
本发明属于一种永生化人骨髓基质干细胞系及其建立方法，原代人骨髓基质干细胞来源于正常流产胎儿骨髓组织，有限稀释法进行单细胞克隆培养纯化原代细胞，通过转染pCIneo-hTERT基因获得永生化。该人骨髓基质干细胞系体外培养能无限克隆增殖，但不具备转化细胞或癌细胞的特征，在细胞生物学特征上是正常细胞；细胞可以定向诱导分化为成骨、软骨以及心肌样细胞，具有多向分化潜能，仍具备成体干细胞的特性。可以在生物工程领域得到应用。这种永生化人骨髓基质干细胞系及其建立方法，为研究人骨髓基质干细胞的生物学行为提供标准细胞系，为组织工程基础研究提供平台，为临床应用提供足量种子细胞，并为建立人骨髓基质干细胞系提供一种有效、可靠的方法。
发明专利
CN200510041961.8
2005-04-19
CN1810957
2006-08-02
C12N5/08(2006.01)I
中国人民解放军第四军医大学
胡蕴玉;滕 勇;白建萍;吕 荣;李 丹
710032陕西省西安市长乐西路17号第四军医大学西京医院骨科研究所
西安慈源有限责任专利事务所
鲍燕平
陕西;61
1.一种永生化人骨髓基质干细胞系及其建立方法，原代人骨髓基质干细胞来源于正常流产胎儿骨髓组织，其特征在于，该永生化人骨髓基质干细胞系体外培养能无限克隆增殖、且具有多向分化潜能；具体包括：1)形态特征H.E染色，永生化人骨髓基质干细胞完全贴壁后呈纤维样或多角型，核多为圆形，细胞核质比大，线粒体、内质网等细胞器发达，属生长旺盛的成纤维样细胞；2)生长特性细胞数较少时，可见典型的单克隆生长方式；当细胞生长至75％融合时，呈纤维样，生长曲线表明，细胞接种1～2天生长缓慢，3～5天进入对数生长期，细胞倍增时间为40.08小时，从细胞生长曲线及1年以上扩增细胞生长情况看，该细胞系为永生化人骨髓基质干细胞系；3)流式细胞分析特征永生化人骨髓基质干细胞表达CD29，CD44，CD106，不表达CD34，CD45，CD14，HLA-DR分子，从细胞表面分子标志证实本研究获得的永生化人骨髓基质干细胞系并非造血系细胞；4)染色体核型分析传至112代的人骨髓基质干细胞染色体数目为2n＝46，其中，中部着丝粒染色体有5对，臂比值为1.33±0.02～1.07±0.03；亚中部着丝粒染色体有7对，臂比值为3.18±0.03～1.45±0.07；端部着丝粒染色体有6对，小染色体有4对，性染色体1对，染色体核型正常；5)生物学特征体外连续培养过程中，永生化人骨髓基质干细胞具有克隆形成能力，无裸鼠致瘤性，在软琼脂内不能生长，血清依赖性无显著降低，仍具有接触抑制性，不具备转化细胞或癌细胞的特征，是正常细胞；6)成体干细胞特征永生化人骨髓基质干细胞可以定向诱导分化为成骨、软骨以及心肌样细胞，具备成体干细胞的特性。