三种鱼病病毒的单管RT－PCR检测的阳性对照的制备方法
本发明是一种病毒性出血性败血症病毒、鱼传染性造血器官坏死症病毒和传染性胰脏坏死症病毒的单管RT-PCR检测的阳性对照的制备方法，其特征在于，分别选取病毒性出血性败血症病毒的G基因、鱼传染性造血器官坏死症病毒的VP基因和传染性胰脏坏死症病毒的N基因作为目的基因片段，将目的基因片段插入pUC57质粒载体，再转染DH5α大肠杆菌，进行体外大量表达，分别扩增出625bp、371bp、206bp的片段。本发明方法制备的阳性对照安全、易保存，避免了现有技术中直接使用病毒感染材料易造成病毒扩散、直接用病毒感染材料提取RNA作阳性对照易降解、不易长期保存等缺陷，便于作为商品化试剂盒的阳性对照，具有很高的实用价值。
发明专利
CN200510038888.9
2005-04-12
CN1775954
2006-05-24
C12Q1/68(2006.01)I
中华人民共和国连云港出入境检验检疫局
段宏安;张 睿;姚燕林;王海涛;周 毅;李金华;刘小琴
222042江苏省连云港市连云区墟沟中山中路339号
南京众联专利代理有限公司
刘喜莲
江苏;32
1、一种病毒性出血性败血症病毒、鱼传染性造血器官坏死症病毒和传染性胰脏坏死症病毒的单管RT-PCR检测的阳性对照的制备方法，其特征在于，分别选取病毒性出血性败血症病毒的G基因、鱼传染性造血器官坏死症病毒的VP基因和传染性胰脏坏死症病毒的N基因作为目的基因片段，将目的基因片段插入pUC57质粒载体，再转染DH5α大肠杆菌，进行体外大量表达，分别扩增出625bp、371bp、206bp的片段，其中，插入的VHSV目的基因片段序列是：agggaagattcctttgtcccgattcgaccagctcaactcaggtgtcctcatgaatttgaagacataaacaagggactggtttccgtcccaactcagatcatccatctcccgctatcagtcaccagcgtctccgcagtagcgagtggccactacctgcacagagtgacttatcgagtcacctgttcgaccagcttctttggagggcaaaccatcgaaaagaccatcttggaggcgaaactgtctcgtcaggaggccacaaacgaggcaagcaaggatcacgagtacccgttcttccctgaaccctcctgcatctggatgaaaaacaatgtccataaggacataactcactattacaagaccccaaaaacagtatcggtggatctctacagcaggaaatttctcaaccctgatttcatagagggggtttgcacaacctcgccctgtcaaactcattggcagggagtctattgggtcggtgccacacctaaagcccattgccccacgtcggaaacactagaaggacacctgttcaccaggacccatgatcacagggtggtcaaggcaattgtggcaggccatcatccctggggactcacaatggcatgcacagtgacattctgcgggacagaatggatcaagaccgacctgggggacctgatc；插入的IHNV目的基因片段序列是：ggcgagttggttaacttcaacgccaacaggggagtcctggccaagatcggggcggtgcttagacccggacagaagctcaccaaggctatctatgggatcattctcatcaacctgtccgacccagccatcgctgccagagccaaggcactgtgcgccatgagactgagcgggacaggaatgacaatggtggggctgttcaaccaagccgcaaagaacctgggcgcccttccagccgaccttttagaggatctgtgcatgaagtcagtggtggagtccgccagacgcattgtcagactgatgaggatcgtagcagaggccccaggggtagcagcaaagtacggtgtcatgatgagcaggatgctcggggaggggtacttcaaggcctacggg；插入的IPNV目的基因片段序列是：atgagcacacacaaggcaaccgcaacttacttgagatccattatgcttccagagactggaccagcaagcattccggacgacataacggagagacacatcctaaaacaagagacctcgtcatacaacttagaggtctccgaatcaggaagtggaattcttgtttgtttccctggagcaccaggatcaagggtcggtgcacactacaggtggaatctgaaccagacgggactagagttcgac。