一种用于分离抗栓物质的定向进化方法及其分离的抗栓物质与纯化方法
本发明公开了一种用于分离抗栓物质的定向进化方法及其分离的抗栓物质与纯化方法。本发明通过构建酵母α交配因子前导肽与部分随机肽的融合DNA片段；插入双酶切并用碱性磷酸酶处理的含有诱导型启动子的穿梭载体；电激转化大肠杆菌，提取质粒后电激转化酿酒酵母；转接转化子至棉子糖/半乳糖液体诱导培养基；取诱导了7天的培养物，离心取上清；做抑制凝血酶试验，筛选阳性转化子。本发明的定向进化方法能简单、高效地发现抗栓肽；这将为抗栓药物和其它药物开发开辟新途径。
发明专利
CN200510035634.1
2005-07-07
CN1737149
2006-02-22
C12N15/62(2006.01)I
刘秋云%何建国
刘秋云;何建国;李子劲
510275广东省广州市新港西路135号中山大学生物工程研究中心
广州粤高专利代理有限公司
陈 卫
广东;44
1、一种用于分离抗栓物质的定向进化方法，其包括如下步骤：(1)构建酵母α交配因子前导肽与部分随机肽的融合DNA片段；(2)插入双酶切并用碱性磷酸酶处理的含有诱导型启动子的穿梭载体；(3)穿梭载体电激转化大肠杆菌，提取质粒后电激转化酿酒酵母；(4)转接转化子至棉子糖/半乳糖液体诱导培养基，诱导培养；(5)取培养物，离心取上清，调pH至中性，加入凝血酶，混匀；1分钟后加入纤维蛋白原，混匀；取无沉淀产生、沉淀量少或产生沉淀时间相对长的活性转化子；