一种分泌型毕赤酵母菌株及其构建方法

摘要：

本发明构建了一种新的分泌型毕赤酵母表达载体用于表达带组氨酸标签的重组D-氨基酸氧化酶。工程菌培养过程中能够分泌重组D-氨基酸氧化酶，与胞内表达D-氨基酸氧化酶的重组菌株相比较，免除了细胞破碎步骤。利用蛋白质工程在DAO基因的N端加上了6个组氨酸，利用金属螯合亲和层析一步法纯化就可以去除杂酶，简化了目的蛋白质提纯工艺。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200510028756.8

申请日期：2005-08-12

公开/公告号：CN1757708

公开/公告日：2006-04-12

主分类号：C12N1/19(2006.01)I

申请/专利权人:中国科学院上海生命科学研究院

发明/设计人:杨 晟;郑华宝;王筱兰;陈 军;杨蕴刘;姜卫红

主申请人地址:200031上海市徐汇区岳阳路320号

专利代理机构:上海智信专利代理有限公司

代理人:缪利明

国别省市代码:上海;31

权利要求：

1、一种表达D-氨基酸氧化酶的分泌型毕赤酵母重组菌株，其特征在于，所述菌株转化有重组质粒pMMWY01，该重组质粒以三磷酸甘油醛脱氢酶基因为启动子，并含有D-氨基酸氧化酶基因和ZeocinTM抗性基因。