一种重组人复合α干扰素的制备方法

引用

摘要：

本发明涉及一种经真核表达制备重组人复合α干扰素(cIFN)制备方法，其主要步骤是：将酵母工程菌(Pichia pastoris GS115/pPIC9K-CIFN)经种子培养、发酵罐培养、外源蛋白诱导表达及目标蛋白纯化后获得cIFN，其特征在于，在外源蛋白诱导表达启动时加入Tween-20、Tween-80、SDS、Triton X-100、Triton X-114、NP-40、CHAPS、Zwittergent3-14、LiDS、胆酸钠、脱氧胆酸钠、辛匍糖苷或/和Brij35，加入量为0.01～10g/L发酵液；外源蛋白诱导表达的温度控制在20～30℃；外源蛋白诱导表达时发酵液的pH值控制在3.0～7.0且发酵液中的甲醇含量控制在1.0～10.0g/L发酵液。本发明不仅实现了cIFN的高密度高发酵表达，而且使cIFN在发酵液中维持了正确的单体分子状态和生物活性，大大抑制了cIFN聚合体和降解产物的形成。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200510028285.0

申请日期：2005-07-29

公开/公告号：CN1733929

公开/公告日：2006-02-15

主分类号：C12P21/02(2006.01)I

申请/专利权人:华东理工大学

发明/设计人:储炬;郝玉有;张嗣良;庄英萍;史琪琪;王永红;杭海峰;刘志敏;杨士珍;吴康华

主申请人地址:200237上海市徐汇区梅陇路130号

专利代理机构:上海顺华专利代理有限责任公司

代理人:陈淑章

国别省市代码:上海;31

权利要求：

1、一种重组人复合α干扰素(cIFN)制备方法，其主要步骤是：将酵母工程菌(PichiapastorisGS115/pPIC9K-cIFN)经种子培养、发酵罐培养、外源蛋白诱导表达及目标蛋白纯化后获得cIFN，其特征在于，在外源蛋白诱导表达启动时加入Tween-20、Tween-80、SDS、TritonX-100、TritonX-114、NP-40、CHAPS、Zwittergent3-14、LiDS、胆酸钠、脱氧胆酸钠、辛匍糖苷(Octylglucoside)或/和Brij35，加入量为0.01～10g/L发酵液；外源蛋白诱导表达的温度控制在20～30℃；外源蛋白诱导表达时发酵液的pH值控制在3.0～7.0且发酵液中的甲醇含量控制在10g/L发酵液以下。

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