一种含耐热限制性内切酶的聚合酶链式反应方法和试剂盒

摘要：

一种含耐热限制性核酸内切酶的聚合酶链式反应方法和相应的试剂盒。选择引物对的位置使扩增产物不含有所述的耐热限制性核酸内切酶识别顺序，或根据既定的扩增产物的限制性内切酶图谱选择含不同内切酶组合的试剂盒。本发明可在不增加保温或其他步骤的情況下完全消除或显著降低非专一扩增产物的形成。根据所用限制性核酸内切酶的耐热程度选择引物，使扩增产物的Tm比内切酶的最高耐热温度稍低并控制循环变性温度与之相适应。发明可用于反转录聚合酶链式反应降低非专一产物或消除基因组DNA对扩增的干扰，也可用于崁套式PCR在后期阻断外套引物的扩增。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200510025631.X

申请日期：2005-04-30

公开/公告号：CN1858218

公开/公告日：2006-11-08

主分类号：C12P19/34(2006.01)I

申请/专利权人:徐定邦%徐文慧

发明/设计人:徐定邦;谢文凯;府雷宇

主申请人地址:200071上海市永兴路58弄2号603室

国别省市代码:上海;31

权利要求：

权利要求书1.一种含耐熱限制性核酸内切酶的聚合酶链式反应方法和試劑盒，反應液模板為基因組DNA或cDNA，反應依次包括如下步骤：(1)模板变性；(2)引物退火；(3)DNA聚合酶催化下延伸合成互补DNA链；(4)按步骤(2)-(4)循环进行扩增反应。其特徵在于反應之初或反應中間在反應液中加至少一種耐熱限制性核酸内切酶，所加入的酶在目標擴增產物内没有識别順序