一种原位中途补加试剂的聚合酶链式反应方法

摘要：

一种将扩增所需试剂成份的一部份用高融点微晶石蜡或有类似特性的固体包埋或阻隔的聚合酶链式反应方法。PCR前阶段变性温度低于石蜡的融点，被包埋或阻隔的试剂不参与反应，反应中途一个循环或反应后期的变性温度高于石蜡的融点，被包埋或阻隔的试剂释放到反应液中参与反应。中途释放试剂可减少反应前期试剂浓度提高反应的严谨性，又可提高反应后期试剂浓度增强扩增，将荧光检测试剂预加在管內在反应结束释放则可完成终点闭管检测。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200510023299.3

申请日期：2005-01-13

公开/公告号：CN1804036

公开/公告日：2006-07-19

主分类号：C12N15/09(2006.01)I

申请/专利权人:徐定邦%徐文慧

发明/设计人:徐定邦;朱德芬;谢文凯;陈有容

主申请人地址:200071上海市永兴路58弄2号603室

国别省市代码:上海;31

权利要求：

1，一种以基因组DNA或cDNA为模板的聚合酶链式反应，至少一种完成扩增反应或完成扩增产物检测所需的试剂置于反应液管内但被固体包埋或阻隔，不与反应液接触。反应依次包括如下步骤：(1)DNA模板变性解链；(2)引物与模板退火；(3)在DNA聚合酶催化下延伸合成互补DNA链；(4)按步骤(1)-(3)循环进行扩增反应；其特征在于在反应中途或结束在不开管盖和不移动反应管的前提下使所說的被固体包埋或阻隔的试剂与反应液接触完成扩增反应或完成扩增产物检测。