一种解旋高分子量全基因组超螺旋结构的方法

摘要：

一种解旋高分子量全基因组超螺旋结构的方法，属于生物基因技术领域，特别涉及高分子量全基因组超螺旋结构的解旋方法。本发明实质上是对Zollinger等人报道的核酸电镜铺展技术进行了改进：①将铺展液中的SLS浓度提高5倍；②将细胞色素C浓度降至50mg/mL；③操作中辅之以适当的流体切力拌动。本发明可一次性获得充分解旋全基因组超螺旋结构的完整基因组分子；结合于基因组分子上的特异互作蛋白质(酶)分子显示清楚；能直接观察并测定到基因组解旋后的每一完整分子信息，如分子量、不均一性等；所获基因组分子图像背景清晰、反差好、光滑、柔韧、无缠结与断裂、且无纵向伸长。本技术能较好用于生物基因组测序所需的各种定位标记图谱构建、核酸-蛋白质相互作用研究、基因组结构研究等领域。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200510022435.7

申请日期：2005-12-29

公开/公告号：CN1807615

公开/公告日：2006-07-26

主分类号：C12N15/00(2006.01)I

申请/专利权人:电子科技大学

发明/设计人:马义才

主申请人地址:610054四川省成都市建设北路二段四号

国别省市代码:四川;51

权利要求：

1、一种解旋高分子量全基因组超螺旋结构的方法，其特征是，它包括以下步骤：1)、生物完整基因组制备，按常规方法制备并提纯生物基因组DNA分子，并在-20℃温度条件下保存备用；2)、支持膜制备，包括：(1)、利用火棉胶和醋酸异戊酯制成2％火棉胶醋酸异戊酯溶液，备用；(2)、洁净培养皿中铺放适当大小干净滤纸一张，盛双蒸水达3/4左右体积，用镊子放洁净铜网于滤纸上，待水面平静后，于水面轻轻滴入一滴2％火棉胶醋酸异戊酯液，静置5分钟使其成膜，用洗耳球从皿边缘吸去双蒸水，50-60℃条件下烘干备用；3)、电子显微学样品制备，包括：(1)、按下表配制铺展液(上相液)