一种医用胶原蛋白粉剂的制备方法
本发明公开了一种医用胶原蛋白粉的制备方法，其特点是采用纯化猪皮为原料，经预处理、分割、冻干、粉碎、浸酸，在温度为4-15℃，用0.5-4.0wt％的复合酶皮胶原处理剂E消化4-12h，得到胶原蛋白的粗制品，再经精制、分级、干燥，获得高纯度的医用胶原蛋白粉剂。这种医用胶原蛋白粉剂用于制备敷料膜、止血海绵、组织工程支架材料、药物缓释载体和医用纤维。
发明专利
CN200510022190.8
2005-12-02
CN1814778
2006-08-09
C12P21/02(2006.01)I
成都佰乐金生物科技有限公司
但卫华;曾 睿;林 海;但年华;米贞健
610065四川省成都市高新区高朋大道5号
成都科海专利事务有限责任公司
邓继轩
四川;51
1.医用胶原蛋白粉的制备方法，其特征在于该制备方法含有以下步骤：(1)预处理：取纯化猪皮100重量份，放入转鼓中，加入温度为32-40℃的去离子水300-600重量份，氯化钠3-10重量份，转动20-150min；控干废液，加入温度为32-40℃的去离子水300-600重量份，平平加1-5重量份，转动20-150min；控干废液，加入去离子水300-600重量份，转动30-40min；控干废液，加入去离子水300-600重量份，转动30-40min；(2)分割：从转鼓中取出预处理过的皮坯，离心机脱水，然后分割成2-6×2-6cm的小块；(3)冻干：将小皮块放入冻干机中，降温参数定为下降2℃/min，直至冷阱温度降至-34℃，抽真空至45-150mbar保持24h，然后缓慢升温8-15h，使冷阱温度升至15-30℃，完成冻干过程；(4)粉碎：在碎皮机上将小皮块粉碎成小皮粒，其粒度要求为：0.5-1.0×0.5-1.0mm；(5)浸酸：取100重量份的干燥小皮粒放于转鼓中，加入1000-5000重量份的三羟甲基氨基甲烷-盐酸盐，pH为7.4的缓冲液，用冰块调节鼓内温度达到4-15℃，间歇转动，转动3min/30min×2-9次，然后连续转动10min，再间歇转动，转动3min/30min×1-6次，静置30min，用耐酸真空泵吸出转鼓中上层清液，再向转鼓中加入HAc，调节pH＝1.8-2.8，转鼓内温度为4-15℃，静置浸泡1-4h；(6)酶消化：调节并保持转鼓内温度达到4-15℃，加入0.5-4.0重量份的复合酶皮胶原处理剂E，连续转动4-12h；(7)一次盐析：用耐酸真空泵将酶消化液泵入离心机中进行离心分离，并用耐酸真空泵将上清液泵入转鼓中，用NaOH溶液调整清液的pH值至7.2-8.2，转动中，缓慢加入(NH4)2SO4，使其浓度达到0.8-1.8mol/L，静置6-14h；(8)酸溶解：用耐酸真空泵将盐析液泵入离心机中进行离心分离，取离心机中的沉淀物，弃上清液，并将离心机中的沉淀物移入转鼓中的事先已经配制好的0.1-1.2MHAc溶液中，转动10-40min，获得粗制胶原蛋白溶液；(9)二次盐析：将粗制胶原蛋白溶液用酸调节pH为1.8-2.8，在离心机中离心分离，用耐酸真空泵将此清液泵入另一转鼓中，转动中，向转鼓中的清液中缓慢加入(NH4)2SO4，使其浓度达到0.8-1.8mol/L，然后，用NaOH溶液调整清液的pH值至6.8-7.4，静置8-18h；(10)酸溶解：用耐酸真空泵泵出上清液，弃之，留取沉淀物；转动中，从转鼓轴孔缓慢加入0.2-0.8MHAc溶液100-300重量份，转动10-40min；(11)分级：将所得到的胶原蛋白溶液用去离子水稀释1-5倍，通过0.2μm的微孔滤膜除去微粒，然后采用凝胶过滤色层分离法进行分级；(12)透析：分别将不同级分的胶原蛋白溶液倒入36mm透析袋，透析分子量10kD，先对0.04mol/L和0.02mol/L的磷酸二氢钾或磷酸二氢钠溶液透析2天，再对蒸馏水透析3天；(13)喷雾干燥：分别将不同级分的胶原蛋白溶液用0.2-0.8MHAc溶液溶解成浓度小于0.5wt％的稀溶液，在温度低于60℃的条件下喷雾干燥，称重包装后密封干燥保存。