一种超氧化物歧化酶提取修饰方法
本发明公开了一种超氧化物歧化酶提取修饰方法，其步骤是：取动物血红细胞，离心洗浮、溶血后；再用-15℃至-25℃的乙醇及氯仿沉淀去除血红蛋白，并加热除去热变性蛋白后，再用温度为-10℃至-20℃的丙酮沉淀收集超氧化物歧化酶；然后进行透析、吸附、洗脱、超滤即得超氧化物歧化酶；最后将超氧化物歧化酶用右旋糖酐进行化学修饰。它提取出的超氧化物歧化酶纯度高、活力强；酶活力的稳定性大大增强，可在45℃条件存放5个月酶活力不降低，常温条件下存放4年酶不失活。
发明专利
CN200510021328.2
2005-07-27
CN1814754
2006-08-09
C12N9/02(2006.01)I
周兴和%周开洪
周兴和;周开洪
610036四川省成都市金牛区金周路531号
成都博通专利事务所
陈树明
四川;51
1、一种超氧化物歧化酶提取修饰方法，其步骤是：a、取动物血红细胞，用其2-4倍体积量的0.7-0.9％的生理盐水，离心洗浮2-3次；再将血红细胞用0.5-1.5倍体积的去离子水，在4-8℃温度下溶血18-21小时，得溶血液；b、往a步的溶血液中加入0.2-0.3倍体积，且温度为-15℃至-25℃的乙醇及0.12-0.14倍体积的氯仿，产生稳定的沉淀后，取上清液；然后，将上清液加热到60-80℃，静置15-25分钟，除去不溶物，收集上清液，重复2-3次；c、在b步制得的上清液中，加入2-3倍体积且温度为-10℃至-20℃的丙酮，得到超氧化物歧化酶沉淀；d、将c步的超氧化物歧化酶沉淀加去离子水溶解后，动态透析得到透析液，将透析液加到已用PH7.6的2.5mmol/L磷酸缓冲液平衡好的色谱柱上吸附，并用PH7.6的2.5mmol/L磷酸钾缓冲液进行梯度洗脱，将洗脱液超滤即得超氧化物歧化酶；e、将d步的超氧化物歧化酶加入去离子水溶解后，将温度降到4℃-10℃，再加入右旋糖酐混匀，在4℃-10℃温度下，静置40-60小时，制得修饰后的超氧化物歧化酶；f、将e步的超氧化物歧化酶，用75-85％的食用酒精灭菌24-28小时，再冷冻干燥、密封后即制得成品。