H7亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白

摘要：

一种H7亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白的制备方法，属于生物技术领域，特别是涉及一种AIV亚型抗原蛋白——H7HA蛋白。本发明提供一种AIV关键的抗原蛋白H7亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白。本发明首先重组质粒pPIC9K-H7HA，然后进行H7HA蛋白真核表达及制备，即得到H7HA抗原蛋白。本发明以H7HA为研究对象，成功获得了针对H7HA抗体的抗原蛋白，经SDS-PAGE、间接ELISA检测，具良好生物活性。其表达量高、特异性强、易于纯化、具有完整的空间构象等特点完全符合ELISA快速检测试剂盒的鉴定要求。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200510017150.4

申请日期：2005-09-21

公开/公告号：CN1935995

公开/公告日：2007-03-28

主分类号：C12N15/09(2006.01)I

申请/专利权人:金宁一

发明/设计人:金宁一;徐一鸣;鲁会军;李 昌;韩 松;金扩世

主申请人地址:130062吉林省长春市青龙路1068号

专利代理机构:吉林长春新纪元专利代理有限责任公司

代理人:白冬冬

国别省市代码:吉林;22

权利要求：

1、一种H7亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白的制备方法，其特征在于：首先重组质粒pPIC9K-H7HA：将pMD18-TH7HA质粒由Sal I酶切，补平后再经EcoR I酶切，回收得到目的片段；pPIC9K质粒由SnaB I、EcoR I双酶切，去磷后回收；将以上回收产物经T4连接酶连接后即获得目的质粒pPIC9K-H7HA；然后进行H7HA蛋白真核表达及制备：用BglII线性化pPIC9K-H7HA重组质粒；线性化后将其电转化至GS115感受态中，在MD平板中培养并经MM板筛选，而后挑取单个菌落于YPD培养基中复苏，提重组体基因组进行PCR鉴定，筛选出的阳性菌株于BMGY培养基中摇菌，离心后转至BMMY培养基中开始甲醇诱导，产物离心后取上清，加入饱和硫酸铵沉淀蛋白，收集蛋白进行进一步纯化即得到H7HA抗原蛋白。