H5亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白
一种H5亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白,属于生物技术领域,特别是涉及一种H5亚型禽流感病毒基因抗原蛋白。本发明提供一种能有效检测致病致死率极高的禽流感H5亚型的HA抗体的H5亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白。本发明首先将pUCM-TH5HA质粒由BamH I、EcoRV双酶切,得到的pPIC9K质粒由EcoR I线性化,再经T4连接酶连接获得质粒pPIC9K-H5HA;用Sal I线性化pPIC9K-H5HA重组质粒,经过一系列工作后即得到H5HA抗原蛋白。本发明表达量高、特异性强、易于纯化、具有完整的空间构象等特点完全符合ELISA快速检测试剂盒的鉴定要求。
发明专利
CN200510017149.1
2005-09-21
CN1936014
2007-03-28
C12P21/02(2006.01)I
金宁一
金宁一;徐一鸣;鲁会军;李 昌;韩 松;金扩世
130062吉林省长春市青龙路1068号
吉林长春新纪元专利代理有限责任公司
白冬冬
吉林;22
1、一种H5亚型高致病性禽流感病毒血凝素基因抗原蛋白的制备方法,其特征在于:首先将pUCM-TH5HA质粒由BamH I、EcoRV双酶切,经补平后回收得到目的片段;pPIC9K质粒由EcoR I线性化,两端分别补平、去磷后回收;将以上回收产物经T4连接酶连接后即获得目的质粒pPIC9K-H5HA;再用SalI线性化pPIC9K-H5HA重组质粒,线性化后将其电转化至GS115感受态中,再在MD平板中培养,而后挑取单个菌落于YPD培养基中复苏,提重组体基因组进行PCR鉴定,筛选出的阳性菌株于BMGY培养基中摇菌,离心后转至BMMY培养基中开始甲醇诱导,产物离心后取上清,加入饱和硫酸铵沉淀蛋白,收集蛋白进行进一步纯化即得到H5HA抗原蛋白。