一种筛选抗稻瘟病放线菌的方法
本发明涉及一种筛选抗稻瘟病放线菌的方法，属农作物病害防治技术领域。本方法包括孢子萌发法初筛活性菌株及平板抑菌实验法复筛活性菌株步骤，及温室盆栽活体试验验证步骤。首先采用孢子萌发法初筛出对稻瘟病菌孢子萌发抑制率≥80％以上的活性菌株；其次用平板抑菌实验法复筛经初筛入选的活性菌株；将平板抑菌实验法筛选得到的活性菌株喷在盆栽供试水稻品种上进行活体活性验证，采用温室活体试验筛选出了具有活体抗稻瘟病活性的放线菌菌株。本方法筛选出的菌株在抗稻瘟病离体及活体筛选模型上均具有较好活性，为追踪分离活性化合物提供了可靠结果。本方法还具有操作简便、能快速有效地筛选出抗稻瘟病放线菌的优点。
发明专利
CN200510011058.7
2005-10-12
CN1778895
2006-05-31
C12N1/20(2006.01)I
云南大学
杨佩文;李铭刚;尚 慧;李一青;李家瑞;崔晓龙;文孟良
650091云南省昆明市翠湖北路2号云南大学微生物研究所
昆明大百科专利事务所
杨宏珍
云南;53
1.一种筛选抗稻瘟病放线菌的方法，包括孢子萌发法初筛活性菌株、平板抑菌实验法复筛活性菌株步骤，其特征在于该方法还包括温室盆栽活体试验验证步骤：其中：(1)孢子萌发法初筛活性菌株步骤中：稻瘟病指示菌株(Pyriculariaoryzae)在24℃下用燕麦片培养基培养的时间为6-8天，待菌丝长满培养基后用自来水洗去气生菌丝，400nm日光灯照射下培养产孢，待2～3天产孢后，用蒸馏水洗下孢子，并加入0.02％Tween-20制成孢子悬浮液备用，悬浮液中孢子浓度为10×10低倍显微镜下每个视野30～40个孢子；随后将菌株发酵液供试样品与孢子悬浮液等体积混合，取一滴滴加在凹玻片上，在25℃下保湿培养6h后检查空白对照孢子的萌发，当空白对照孢子的萌发率达到85％后，查看菌株发酵液对稻瘟病孢子萌发的抑制情况，初步筛选出对稻瘟病菌孢子萌发抑制率大于80％的活性菌株；(2)采用温室盆栽活体试验步骤为：a.供试水稻苗水稻种子浸泡催芽后，播于装有秧田土的长宽为5×15cm，深10cm的塑料育苗盒内，每盒50苗，在温度为25-28℃的温室内育苗，按0.2克/盒追施尿素，共2～3次，试验用药前一天选择2.5～3.5叶期长势一致的盆栽稻苗，按序排放，供试验用；b.将平板抑菌实验法复筛得到的活性菌株发酵液供试样品喷在盆栽稻苗上，在温度为25-28℃的温室内放置24小时后喷雾接种稻瘟病原菌，在24℃保湿培养中箱黑暗条件下培养20h，取出放入温度为25-28℃的温室内培育5～7天后按现有的稻瘟病分级标准进行病情分析，筛选出室内防治效果≥70％以上的抗稻瘟病活性菌株。