一种反硝化细菌直接倍比稀释PCR快速定量检测方法

摘要：

一种反硝化细菌直接倍比稀释PCR快速定量检测方法，它涉及一种反硝化细菌的检测方法。它解决了以往检测反硝化细菌的方法繁琐，不能定量检测，检测时间长，无法为生产和科学研究提供有效和即时的数据，检测费用高的问题。它通过以下步骤实现：(一)菌体的制备；(二)将制备的菌体在冰上进行倍比稀释；(三)倍比稀释液在冰上进行PCR操作；(四)采用三管或五管平行法；(五)PCR扩增；(六)1.0％的琼脂糖电泳检测；(七)观察结果，记数、查表计算得出结论。本发明中经倍比稀释的反硝化细菌直接进行PCR检测，方法简单，可定量检测，检测时间短，检测费用低，并且可以即时、准确的提供数据用于生产和科学研究。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200510010454.8

申请日期：2005-10-21

公开/公告号：CN1769471

公开/公告日：2006-05-10

主分类号：C12Q1/25(2006.01)I

申请/专利权人:哈尔滨工业大学

发明/设计人:马 放;魏 利

主申请人地址:150090黑龙江省哈尔滨市南岗区海河路202号（哈工大二校区）

专利代理机构:哈尔滨市松花江专利商标事务所

代理人:岳泉清

国别省市代码:黑龙江;23

权利要求：

1、一种反硝化细菌直接倍比稀释PCR快速定量检测方法，其特征是它通过以下步骤实现：(一)菌体的制备；(二)将制备的菌体在冰上进行倍比稀释；(三)倍比稀释液在冰上进行PCR操作；(四)采用三管或五管平行法；(五)PCR扩增；(六)1.0％的琼脂糖电泳检测；(七)观察结果，记数、查表计算得出结论；所述的步骤(三)中PCR的反应体系为20μL由2μLBuffer(10×)，2μLdNTP，1μL0.1μmol/L的特意引物IDNBF：5’-GC[T/C][C/T]ACCAAG[G/C]CGACGATC-3’共19bp、1μL0.1μmol/L的特意引物IIDNBR：5’-ACCAGGGTATCTAATCCTG-3’共19bp、0.3UrTaq酶、11.7μL去离子水和2μL经梯度稀释的样品组成。