一种黄杆菌两次冷冻-解冻固定化微生物载体的制备方法
本发明涉及一种黄杆菌两次冷冻-解冻固定化微生物载体的制备方法，向预先混合的剂聚乙烯醇(PVA)-海藻酸钠(Na·Alg)凝胶液里添加适量活性炭、沸石粉和吐温80，将黄杆菌液体种子与凝胶液混匀，在35℃-48℃条件下，将混合液体按顺序均匀倾倒在预先铺设两层无纺布的培养皿中，于零下10℃-15℃冰箱中冷冻15h-18h，解冻；再次冷冻、解冻，然后在固定剂中加固，最后以无菌水浸泡，切割成任意形状，增殖培养，备用。本发明制备得到的载体弹性优良，扩散传质性能优异，固定的黄杆菌活性良好，菌体基本不泄露，载体机械强度大，长期液体培养Na·Alg不溶解，载体不发生破碎；载体的外形和大小可任意控制，再生简单，可长期重复使用。
发明专利
CN200410100432.6
2004-12-22
CN1796553
2006-07-05
C12N11/04(2006.01)I
中国科学院沈阳应用生态研究所
李海波;李培军;鞠京丽;张 轶;许华夏
110016辽宁省沈阳市沈河区文化路72号
沈阳科苑专利商标代理有限公司
许宗富%周秀梅
辽宁;21
1、一种黄杆菌两次冷冻-解冻固定化微生物载体的制备方法，其特征在于：1)凝胶液配制：按照质量百分比称取聚乙烯醇9.5％-10.5％，海藻酸钠0.2％-1.0％，活性炭4％-6％，沸石粉0.3％-1.5％，余量为水，灭菌冷却到35℃-48℃，加入水溶液质量0.5％-0.8％的无菌吐温80，并加入海藻酸钠的水溶液总质量15％-30％的黄杆菌液体种子，搅拌均匀；2)加固剂配置：按质量百分比配制7.0％-10.0％的Na2SO4，灭菌冷却，备用；3)物理交联固定化微生物载体的制备：将配置好的凝胶液在无菌条件下倾注入培养皿，凝胶液厚度为2-4mm，然后在凝胶液上层铺设一层无纺布，倾注3-5mm厚的凝胶液于无纺布上，再于凝胶液上铺设一层无纺布，最后在第二层无纺布上倾注2-4mm厚的凝胶液；待凝胶液自然冷却后，置于零下10℃-15℃冰箱中冷冻15h-18h，常温无菌条件下解冻，再次置于零下10℃-15℃冰箱中冷冻15h-18h，常温无菌条件下解冻，然后在Na2SO4固定剂中加固15h-20h，最后以无菌水浸泡24h，将载体切割成任意形状，增殖培养，制得黄杆菌Flavobacteriumsp.固定化载体产品。