一种扩增水稻T-DNA插入位点侧翼序列的方法

摘要：

本发明公开了一种扩增水稻T-DNA插入位点侧翼序列的方法。本发明所提供的扩增水稻T-DNA插入位点侧翼序列的方法，包括以下步骤：1)酶切连接：在同一反应体系中，利用平端限制性内切酶酶切水稻基因组DNA并利用T₄ DNA连接酶将得到的酶切片段与不对称接头序列连接，得到酶切连接液；所述不对称接头序列为由一条长链和一条短链组成的双链接头，长链和短链互补，并且在水稻基因组中无同源序列，长链具有至少两个嵌套引物的结合位点；2)以步骤1中的酶切连接片段为模板，以根据所述不对称接头序列和T-DNA的左边界序列设计的嵌套引物进行两轮嵌套引物PCR扩增，得到T-DNA插入位点侧翼序列。本发明适用于高通量水稻基因组分析。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410096456.9

申请日期：2004-12-01

公开/公告号：CN1782074

公开/公告日：2006-06-07

主分类号：C12N15/09(2006.01)I

申请/专利权人:中国农业科学院生物技术研究所

发明/设计人:路铁刚;彭 昊;杨永智;吴金霞;黄红梅;宛淑艳

主申请人地址:100081北京市海淀区中关村南大街12号中国农科院生物技术所

专利代理机构:北京纪凯知识产权代理有限公司

代理人:关 畅

国别省市代码:北京;11

权利要求：

1、一种扩增水稻T-DNA插入位点侧翼序列的方法，包括以下步骤：1)酶切连接：在同一反应体系中，利用平端限制性内切酶酶切水稻基因组DNA并利用T4DNA连接酶将得到的酶切片段与不对称接头序列连接，得到酶切连接液；所述不对称接头序列为由一条长链和一条短链组成的双链接头，长链和短链互补，并且在水稻基因组中无同源序列，长链具有至少两个嵌套引物的结合位点；2)以步骤1中的酶切连接片段为模板，以根据所述不对称接头序列和T-DNA的左边界序列设计的嵌套引物进行两轮嵌套引物PCR扩增，得到T-DNA插入位点侧翼序列。