一种高效生产重组腺病毒载体的方法

摘要：

本发明涉及一种高效生产重组腺病毒载体的方法，属于细胞工程技术领域。以HEK细胞为重组腺病毒载体的生产细胞，使游离的细胞在悬浮培养条件下形成细胞团或使细胞团解聚为游离细胞，利用细胞团的自然沉降和/或旋转过滤器截流细胞团，更换培养基或连续灌注培养基，以重组腺病毒感染HEK细胞团并继续培养使其在细胞内扩增。本发明的优点是：①细胞活力≥90％、活细胞密度≥1×10⁷ells/ml。②用重组腺病毒载体直接感染HEK细胞团并在其中的细胞内扩殖，利用HEK细胞团的自然沉降或采用内置式旋转滤器实施培养基更换或连续灌注。③pAd-TH-GFP的滴度可达到1-5×10¹³GTU/ml、5L搅拌罐式生物反应器的pAd-TH-GFP批生产能力达到1-2×10¹⁷GTU/batch，重组腺病毒载体的收获方便。④生产过程衔接紧密、顺畅，规模放大容易。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410091774.6

申请日期：2004-11-26

公开/公告号：CN1778933

公开/公告日：2006-05-31

主分类号：C12N15/861(2006.01)I

申请/专利权人:中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所

发明/设计人:陈昭烈;刘 红;刘兴茂;吴本传;黄培堂;李世崇;倪小平;王启伟

主申请人地址:100071北京市丰台区东大街20号

专利代理机构:北京北新智诚知识产权代理有限公司

代理人:张爱群

国别省市代码:北京;11

权利要求：

1.一种高效生产重组腺病毒载体的方法，其特征在于：以HEK细胞为重组腺病毒载体的生产细胞，采用搅拌式细胞培养瓶或/和装备有内置式旋转滤器的搅拌罐式生物反应器为悬浮培养体系；使游离的细胞在悬浮培养条件下形成细胞团或使细胞团解聚为游离细胞，利用细胞团的自然沉降和/或旋转过滤器截流细胞团，更换培养基或连续灌注培养基，取样监测细胞团的粒径和培养基中的葡萄糖含量、计数活细胞密度；以重组腺病毒感染HEK细胞团并继续培养使其在细胞内扩增，收获含有大量重组腺病毒载体的HEK细胞团。