一种重组微生物谷氨酰胺转氨酶基因及其制备方法

摘要：

本发明属于食品工业生物技术领域，主要是利用分子生物学和基因工程技术，将来自茂原链霉菌的谷氨酰胺转氨酶基因克隆分离后，构建了含有该基因的重组原核表达载体pQE30xa-TGase，并在大肠杆菌JM109菌株中获得了表达，表达产物经过亲和层析分离纯化后，可以得到纯度为90％左右的重组谷氨酰胺转氨酶，重组后的谷氨酰胺转氨酶酶活性达到2.2U/ml，高于原始菌株2-3倍。利用该酶进行酪蛋白改性和重叠虾的制作均取得良好效果。由于本发明利用大肠杆菌生产谷氨酰胺转氨酶，操作简单，产酶活性较高，生产成本低，表达的酶易于分离纯化，可为今后谷氨酰胺转氨酶的生产提供一条切实可行的途径。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410065803.1

申请日期：2004-12-20

公开/公告号：CN1796561

公开/公告日：2006-07-05

主分类号：C12N15/54(2006.01)I

申请/专利权人:南京大学

发明/设计人:田兴军;张智俊;李亚玲

主申请人地址:210093江苏省南京市汉口路22号

专利代理机构:南京知识律师事务所

代理人:张苏沛

国别省市代码:江苏;32

权利要求：

1.一种重组微生物谷氨酰胺转氨酶基因，长度1246，其特征是：1-180位的核苷酸为编码谷氨酰胺转氨酶基因前导肽的序列，该段序列与酶的跨膜运输和正确折叠有密切关系；420-422位的核苷酸为编码酶活性中心cys的序列；谷氨酰胺转氨酶全长基因序列为：atgcgcatacgccggagagctctcgtcttcgccactatga40gtgcggtgttatgcaccgccggattcatgccgtcggccag80gcgaggccgccgccgacaatggcgcgggggaaagagacga120agtcctacgccgaaacctaccgcctcacggcggatgacgt160cgcgaacatcaacgcgctcaacgaaagcgctccggccgct200tcgagcgccggcccgtcgttccgggcccccgactccgacg240acagggtcacccctcccgccgagccgctcgacaggatgcc280cgacccgtaccgtccctcgtacggcagggccgagacggtc320gtcaacaactacatacgcaagtggcagcaggtctacagcc360accgcgacggcaggaagcagcagatgaccgaggagcagcg400ggagtggctgtcctacggctgcgtcggtgtcacctgggtc440aattcgggtcagtacccgacgaacagactggccttcgcgt480ccttcgacgaggacaggttcaagaacgagctgaagaacgg520caggccccggtccggcgagacgcgggcggagttcgagggc560cgcgtcgcgaaggagagcttcgacgaggagaagggcttcc600agcgggcgcgtgaggtggcgtccgtcatgaacagggccct640ggagaacgcccacgacgagagcgcttacctcgacaacctc680aagaaggaactggcgaacggcaacgacgccctgcgcaacg720aggacgcccgttccccgttctactcggcgctgcggaacac760gccgtccttcaaggagcggaacggaggcaatcacgacccg800tccaggatgaaggccgtcatctactcgaagcacttctgga840gcggccaggaccggtcgagttcggccgacaagaggaagta880cggcgacccggacgccttccgctccgccccgggcaccggt920ctggtcgacatgtcgagggacaggaacattccgcgcagcc960ccaccagccccggtgagggattcgtcaatttcgactacgg1000ctggttcggcgcccagacggaagcggacgccgacaagacc1040gtctggacccacggaaatcactatcacgcgcccaatggca1080gcctggggtgccatgcatgtctcacgagagcaagttccgc1120aactgggtccgagggttactcggacttcgaccgcggggag1160ccctatgtggtatcaccctctccatccccaagaatgctgg1200aacaccgcccccgacaaggtaaagcagggctggcgtgatg1240tgagcg1246