一种可消除非特异性条带的PCR方法以及利用该方法制备的RT-PCR芯片

摘要：

本发明公开了一种可消除非特异性条带、一步法精确获得目的基因的PCR方法以及利用这种方法制备的RT-PCR芯片。具体是指：在PCR(RT-PCR、PCR)目的基因的引物设计时，引物3’末端一个或多个碱基采用硫代磷酸化修饰；延伸反应所用的聚合酶为具有Pfu高保真DNA聚合酶。由于具有最强的3’-5’外切酶活性的Pfu高保真DNA聚合酶可以识别并关闭引物3’末端8bp内任一个或多个碱基不匹配的延伸反应。因此在各种PCR反应中，只允许与引物3’末端8bp内完全匹配的模板得以延伸，并在延伸中保持与模板的高度忠实性。本发明构建了一个多用途、高精度、高通量、适用于芯片技术获得特异基因表达(包括编码区、转录组、表达谱比较)和诊断的技术平台。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200410045031.5

申请日期：2004-07-09

公开/公告号：CN1718737

公开/公告日：2006-01-11

主分类号：C12P19/34(2006.01)I

申请/专利权人:南华大学

发明/设计人:杨惠龄;廖端芳;徐阳炎;罗迪贤;李 凯

主申请人地址:421001湖南省衡阳市蒸湘区常胜西路28号

专利代理机构:衡阳市科航专利事务所

代理人:傅戈雁

国别省市代码:湖南;43

权利要求：

1、一种可消除非特异性条带的PCR方法，具有常规PCR基本步骤，其特征是在目的基因的引物设计时，引物3’末端一个或多个碱基采用硫代磷酸化修饰；延伸反应所用的聚合酶为具有最强的3’-5’外切酶活性的Pfu高保真DNA聚合酶。