RNA酶H活性的测定

摘要：

本发明提供了通过将靶核酸与荧光标记的寡核苷酸探针杂交以检测核酸酶介导的靶核酸切割的方法，所述寡核苷酸探针与所述靶核酸互补并且在其一末端含有荧光团而在另外一末端则有猝灭基团。当所述探针不与靶核酸杂交时，探针采取使所述荧光团和猝灭剂相接近的构象以使所述猝灭剂猝灭荧光团的荧光信号，而所述探针-靶杂交体的形成导致所述荧光团和猝灭剂的充分分离以减少对荧光团荧光信号的猝灭。一旦杂交，所述方法使所述探针-靶杂交体与具有核酸酶活性的试剂接触，所述试剂的量足以选择性切割所述靶核酸并因此释放出完整探针。接着通过与所述探针-靶杂交体的信号相比所述荧光团荧光信号的下降来测量探针的释放。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN200380107403.6

申请日期：2003-12-22

公开/公告号：CN1732272

公开/公告日：2006-02-08

主分类号：C12Q1/68(2006.01)I

申请/专利权人:惠氏公司

发明/设计人:M·W·奥尔森;J·F·奥康奈尔

主申请人地址:美国新泽西州

专利代理机构:中国专利代理(香港)有限公司

代理人:张轶东%刘 玥

国别省市代码:美国;US

权利要求：

1.检测核酸酶介导的靶核酸切割的方法，所述方法包括：(a)将靶核酸与荧光标记的寡核苷酸探针杂交，所述探针与所述靶核酸互补并且在一末端含有荧光团而在另一末端含有猝灭基团，其中(i)当所述探针不与所述靶核酸杂交时，所述探针采取使荧光团和猝灭剂相接近的构象以使所述猝灭剂猝灭所述荧光团的荧光信号并且(ii)所述探针-靶杂交体的形成导致所述荧光团和猝灭剂充分分离以减少所述荧光团的荧光信号的猝灭；(b)将所述探针-靶杂交体与具有核酸酶活性的试剂接触，所述试剂的量足以选择性地切割所述靶核酸并且因此释放出完整的探针；和(c)通过测量所述荧光团的荧光信号与所述探针-靶杂交体的信号相比时信号的减少来检测探针的释放。