一种从龙眼果皮中提取过氧化物酶方法
一种从龙眼果皮中提取过氧化物酶方法，包括粗酶液的提取、(NH<sub>4</sub>)<sub>2</sub>SO<sub>4</sub>盐析、Sephadex G-25 Medium柱脱盐、DE-52柱层析、羟基磷灰石high resolution柱层析、Sephacryl S-200 HR柱层析和超滤浓缩。本发明的优点是取材方便、方法简单、成本低且酶的活性高，可以获得高纯度的过氧化物酶。另外，以罐头厂生产龙眼罐头废弃的果皮为原料，更降低了提取过氧化物酶的原料成本。
发明专利
CN03157806.3
2003-08-27
CN1488752
2004-04-14
C12N9/08
福建农林大学
潘东明;林琳;郭志雄
350002福建省福州市金山福建农林大学产业处
福州元创专利代理有限公司
林友明%蔡学俊
福建;35
1、一种从龙眼果皮中提取过氧化物酶方法，其特征在于由以下方法组成：(1)选取无病虫害的龙眼果皮，洗净，经液氮处理后按照果皮质量：Tris-HCl缓冲液体积为1∶6加入4℃的0.1M pH7.0 Tris-HCl缓冲液；按照Trtiton X-100体积：Tris-HCl缓冲液体积为1∶1000加入Trtiton X-100；再加入占果皮质量15％的聚乙烯聚吡咯烷酮，匀浆；再用四层纱布过滤，19000×g 4℃离心20min，弃去沉淀，获得上清液A；(2)在上清液A中加入(NH4)2SO4粉末，0℃条件下边加边搅拌至30％饱和度，搅拌0.5h后，19000×g 4℃离心20min，弃去沉淀，获得上清液B；(3)在上清液B中加入(NH4)2SO4粉末，0℃条件下边加边搅拌至80％饱和度，搅拌1h，20000×g 4℃离心20min，弃去上清，获得沉淀物A；(4)将沉淀物A用0.05M pH8.0 Tris-HCl悬浮，15000×g 4℃离心10min，弃沉淀，获得上清液C；(5)将上清液C上Sephadex G-25 Medium柱，用0.01M pH8.0 Tris-HCl以流速为2-6ml/min洗脱，收集洗脱液，检测并合并有酶活性的洗脱液，获得洗脱液A；(6)将洗脱液A上DE-52柱，以0～0.3M NaCl梯度洗脱，流速为0.5-2ml/min，收集洗脱液，检测并合并有酶活性的洗脱液，获得洗脱液B；(7)将洗脱液B用PEG20000浓缩，获得洗脱液C，再用0.01M pH7.0磷酸缓冲液透析，获得洗脱液D；(8)将羟基磷灰石high resolution柱，以0.01M pH 7.0磷酸缓冲液平衡，再将洗脱液D上羟基磷灰石high resolution柱层析，流速为0.2-0.6ml/min，收集洗脱液，检测并合并有酶活性的洗脱液，获得洗脱液E；(9)将洗脱液E用PEG20000浓缩，获得洗脱液F，再用0.05M pH7.0磷酸缓冲液透析，获得洗脱液G；将Sephacryl S-200 HR柱以0.05M pH7.0磷酸缓冲液平衡，再将洗脱液G上Sephacryl S-200 HR柱层析，流速为0.25-0.6ml/min，收集洗脱液，检测并合并有酶活性的洗脱液，获得洗脱液H；(10)超滤浓缩洗脱液H。