一种以贾第鞭毛虫病毒作基因表达载体的真核表达系统

摘要：

本发明提供一种以贾第鞭毛虫病毒作基因表达载体的真核表达系统，利用贾第鞭毛虫(Giardia)dsRNA病毒(virus)作为基因转染载体，采用DNA转染方式的真核表达系统和以RNA转染方式的真核表达系统两种。蓝氏贾第虫病毒基因组小(6273bp)，稳定，易纯化，能在体外有效地感染贾第虫滋养体，且具有较小的细胞毒性，贾第虫病毒基因复制的拷母数多，而且其病毒的衣壳蛋白是在贾第虫体内合成的优势蛋白。贾第虫为真核生物，外源基因在贾第虫体内表达出的蛋白具有活性。贾第虫在体外易培养，随着贾第虫的传代培养，外源基因可无限制地在体外大量制备。克服现用真核基因表达系统表达效率低，易出现基因污染等问题。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN03111079.7

申请日期：2003-02-25

公开/公告号：CN1514002

公开/公告日：2004-07-21

主分类号：C12N15/85

申请/专利权人:中国人民解放军军需大学

发明/设计人:张西臣;田宗成;李建华;尹继刚;;杨举

主申请人地址:130062吉林省长春市西安大路175号

专利代理机构:吉林长春新纪元专利代理有限责任公司

代理人:陈宏伟

国别省市代码:吉林;22

权利要求：

1、一种以贾第鞭毛虫病毒作基因表达载体的真核表达系统，其特征在于是以DNA转染方式的真核表达系统，包括以下步骤：将装在质粒载体上的贾第虫病毒全长cDNA的5’端非翻译区前连接贾第虫基因的启动子和信号肽基因，后在5’端367至800bp间和3’端637至2017bp间分别用NcoI和XhoI酶切，并在此处插入外源基因，构建含外源基因的重组质粒，然后将该质粒通过电穿孔等方法转染贾第虫，利用贾第虫的启动子和信号肽，通过病毒的同源重组表达外源基因。