一种以聚合酶链式反应为基础的基因定量方法
本发明属于分子生物学技术，即一种以聚合酶链式反应为基础的基因定量方法。本发明PCR接续转录反应方法分二步进行。第一步为先作比通常循环数少5-10个循环数的低循环数PCR，当扩增产物呈直线累积、PCR平坡出现前结束反应。由于在PCR一个引物的5’端引入了RNA聚合酶识别顺序，PCR目标扩增产物可作为离体转录合成RNA的模板。第二步为在加入转录试剂后立刻启动RNA合成。在规定的转录条件下RNA的合成量与模板数量即PCR扩增产物量成正比，因而也反映了测定样品中原始模板的数量，并且，由转录反应合成的RNA量可达模板数量的几百至千倍，从而可方便地用溴乙锭或其它核酸染色剂定量测定。本基因定量方法不用放射性同位素，不涉及抗原抗体作用，也毋须进行核酸杂交，方法简单、准确，有广泛的应用价值。
发明专利
CN03100022.3
2003-01-06
CN1515683
2004-07-28
C12Q1/68
徐定邦%徐文慧
徐定邦;朱德芬;徐文慧;孙崇荣
201900上海市永兴路58弄2号603室
上海;31
权利要求书1、一种以聚合酶链式反应为基础的基因定量方法，其特征在于先作比通常循环数少5-10个低循环数聚合酶链反应，在进入平坡前停止聚合酶链式反应，在加入转录反应试剂后立即接续转录反应合成RNA、进行测定。