一种基因表达人组织激肽释放酶蛋白的分离纯化方法

摘要：

本发明涉及人组织激肽释放酶的提取，是一种基因表达人组织激肽释放酶蛋白的分离纯化方法。操作如下：(1)上清液分离；(2)层析：①台阶梯度洗脱：先用20～30mM、pH7～8的缓冲液平衡柱子，然后上清液泵入柱内；用内含0.1～0.2M NaCl的缓冲液洗脱，然后换内含0.3～0.5M NaCl的缓冲液，收集馏分，备用；先用10～20mM NaAc、pH5.0～6.0平衡柱子，然后台阶梯度洗脱收集馏分；接着用线性梯度洗脱，洗脱液中盐成分范围为0.1M NaCl至0.5M NaCl，收集馏分保存；(3)亲和色谱分离纯化。其优点为：降低了操作成本，适于大规模生产应用；分离效果较好。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN02133164.2

申请日期：2002-10-11

公开/公告号：CN1488753

公开/公告日：2004-04-14

主分类号：C12N9/64

申请/专利权人:中国科学院大连化学物理研究所

发明/设计人:张玉奎;张维冰;杨青;徐茂兰

主申请人地址:116023辽宁省大连市中山路161号

专利代理机构:沈阳科苑专利商标代理有限公司

代理人:许宗富%周秀梅

国别省市代码:辽宁;21

权利要求：

1.一种基因表达人组织激肽释放酶蛋白的分离纯化方法，其特征在于具体过程操作如下：(1)细胞培养上清液的分离：将含有人组织激肽释放酶的培养液离心分离，取上清液备用；(2)离子交换层析分离：①采用台阶梯度洗脱：先用20～30mM、pH7～8的缓冲液平衡柱子，然后将上清液泵入柱内；再用20～30mM、pH7～8内含0.1～0.2M NaCl的缓冲液洗脱，然后换20～30mM pH7～8内含0.2～0.4M NaCl的缓冲液，收集此时的馏分，备用；②先用10～20mM NaAc、pH5.0～6.0平衡柱子，然后将样品载入柱内，用平衡缓冲液继续冲柱，再用10～20mM NaAc、pH5.0～6.0内含0.05～0.1M NaCl的缓冲液洗脱，收集馏分a；然后用10～20mM NaAc、pH5.0～6.0内含0.1～0.15MNaCl的缓冲液洗脱，收集馏分b；接着用线性梯度洗脱，洗脱液中盐成分范围为0.1M NaCl至0.5M NaCl，收集馏分保存；(3)亲和色谱分离纯化：按常规方法操作，得产品。