一种从动物血液中提取高纯度铜锌超氧化物岐化酶的方法

摘要：

本明涉及一种从动物血液中提取高纯度超氧化物岐化酶的方法，本方法包括如下步骤：在动物血液中加入抗凝剂，去除沉淀，对上清进行３～６级的温度梯度处理，再去除沉淀，对上清液用硫酸铵进行两级不同饱和度盐析，并对最终的沉淀用缓冲液洗脱除去残留的盐析液，最后得纯度及比活都比较高的ＳＯＤ酶。本发明具有操作简单、成本低、酶的收率及比活都比较高的优点。

专利类型：发明专利

申请/专利号：CN00117762.1

申请日期：2000-06-03

公开/公告号：CN1274754

公开/公告日：2000-11-29

主分类号：C12N9/08

申请/专利权人:吉林大学生命科学技术研究所

发明/设计人:赵长富; 潘智勇; 刘宁; 韩素珍

主申请人地址:130023吉林省长春市柳条路8号

专利代理机构:吉林大学专利事务所

代理人:张景林

国别省市代码:吉林;22

权利要求：

权利要求书一、一种从动物血液中提取高纯度铜锌超氧化物岐化酶的方法，步骤如下：1．将新鲜的动物血液中加入重量比为0.2—0．5％的柠檬酸钠抗凝剂，低温4—8℃放置30—100分钟，待溶液分层，去掉大部分上清；2．温度梯度处理：对上清液进行3—6级温度梯度处理，初级温度为40—50℃，终级温度为70—80℃，每两级间温度梯度差为5—10℃，上清液每级温度梯度处理都是先由室温迅速升温至某级温度、保持10—30分钟后再迅速降至室温，每级降温后都低速4000—6000转／分钟离心10—30分钟，除去沉淀；3．对上清液进行两级盐析：首先加入硫酸铵，使盐析液饱和度为45—70％，充分搅拌溶解，低温4—8℃放置12—36小时后，低速4000—6000转／分钟离心10—30分钟，去除沉淀；继续在上清液中加入硫酸铵使盐析液饱和度为85—95％，充分搅拌溶解，低温4—8℃放置12—36小时后，低速4000—6000转／分钟离心10—30分钟，收集沉淀，记为沉淀1；上清液再低温4—8℃放置12—36小时，用G4磨沙漏斗进行抽滤，收集沉淀，记为沉淀2；4．用浓度为0．05—0．2M、pH＝7．0的磷酸钾缓冲液分别溶解步骤3的两组沉淀，10000M超滤去除硫酸铵即得比活和纯度略有不同的两组SOD酶。